NLRP3 炎症小体抗体怎么选？一篇讲清激活机制和检测要点

一、NLRP3 是什么

NLRP3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3，别名 NALP3、Cryopyrin、CIAS1、PYPAF1）是一种胞内传感器蛋白。静息状态下，NLRP3 结合 ADP 处于自抑制状态。

当细胞检测到膜完整性损伤信号（病原体、DAMP、环境颗粒等），NLRP3 被解锁并招募接头蛋白 ASC（PYCARD）和 pro-caspase-1，组装成高分子量炎症小体复合物。pro-caspase-1 在复合物内被切割活化成 Caspase-1 p20/p10，后者进一步切割：

• IL-1β 和 IL-18：成熟并分泌；

• GSDMD：释放 N 端成孔片段，引发焦亡。

NLRP3 激活还与 HMGB1 分泌、Th2 分化相关。

二、NLRP3 被什么激活

几乎所有刺激物最终都汇聚到胞内 K⁺ 外流这个共同节点：

• 胞外 ATP（P2X7 受体）；

• Nigericin（离子载体）；

• ROS（线粒体损伤）；

• 结晶类：尿酸钠（MSU）、胆固醇、淀粉样 β 纤维；

• 环境颗粒：石棉、二氧化硅、铝盐；

• 胞质 dsRNA。

激活后 NLRP3 被转运到微管组织中心，由 NEK7 解锁，再转位到反式高尔基体网络（dTGN）囊泡膜，通过结合 PI(4)P 锚定，组装成活性复合物。

三、Abmart NLRP3 抗体的内源验证数据

以下 WB 验证数据仅对应 Abmart NLRP3 抗体货号 TB4673（RRID: AB_3751022）；其他 NLRP3 货号（如 P60622R3）的验证数据以Abmart官网介绍为准。货号 TB4673 在两种细胞模型上做了内源验证：

1. LPS 诱导 RAW264.7 小鼠巨噬细胞

LPS 10 μg/mL 处理 8 h，每孔上样 25 μg 总蛋白，一抗 1:1000 稀释、4 °C 过夜。LPS 刺激后 NALP3/CIAS1 条带（约 119 kDa）明显增强。

2. MCF-7 人乳腺癌细胞 NLRP3 敲低（KD）验证

每孔上样 25 μg 总蛋白，一抗 1:1000 稀释、4 °C 过夜。NLRP3 KD 组与对照组相比，NALP3/CIAS1 条带显著减弱，说明抗体识别的是内源 NLRP3，而非非特异性条带。

四、Abmart NLRP3 抗体产品参数

五、推荐稀释比例

六、缓冲液与储存

• 缓冲液：50 mM Tris-Glycine（pH 7.4），含 0.15 M NaCl、40% 甘油、0.05% Procline 300、0.05% BSA；

• 储存条件：−20 °C，自收货之日起 12 个月；

• 避免反复冻融。

七、实验设计建议

NLRP3 炎症小体实验必须做两步刺激：

1. 启动信号（Priming）：LPS 100 ng/mL 处理 3–4 h，上调 NLRP3 和 pro-IL-1β 表达（这一步影响 NLRP3 总蛋白水平）；

2. 激活信号（Activation）：Nigericin 10–20 μM 处理 1–2 h，或 ATP 5 mM 处理 30 min，触发炎症小体组装和 Caspase-1 活化。

对照设计：

• 未刺激对照；

• LPS 单独组（只启动不激活，看 NLRP3 总蛋白）；

• LPS + Nigericin 组（看 Caspase-1 切割和 GSDMD 切割）；

• Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 预处理组（验证切割特异性）。

检测配套：NLRP3（总蛋白）+ Cleaved Caspase-1 + Cleaved GSDMD + IL-1β 四件套，才能完整判断炎症小体是否真正激活。

八、研究应用场景

1. 天然免疫与炎症：细菌/病毒感染模型中 NLRP3 激活水平检测；

2. 自身炎症性疾病：Cryopyrin 相关周期性综合征（CAPS）等 NLRP3 突变疾病；

3. 代谢炎症：痛风（MSU 结晶）、动脉粥样硬化（胆固醇结晶）；

4. 神经退行性疾病：阿尔茨海默病（Aβ 纤维）；

5. 药物筛选：NLRP3 抑制剂（MCC950 等）评价。

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